食品中残留农业化学品肯定列表制度有哪些残留？

样品用乙腈萃取，固相萃取柱纯化，液相色谱使用 C18柱分离。使用乙腈和 0.1% 甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源和多反应监测（MRM）在正离子模式下进行定量分析。该方法前处理简单快速，准确度好，灵敏度高，适用于韭菜中10种除草剂残留量的测定。

随着农业现代化的深入发展，除草剂已广泛应用于种植业。尽管除草效果显着，但会造成除草剂及其代谢产物在蔬菜中的残留，危害消费者的健康。目前，世界各国政府都加大了对蔬菜等食品中除草剂等农药的监管力度，并制定了严格的限量要求。日本制定的《食品中农药残留肯定清单制度》中规定了大部分农药的限量值。 0.01 mg/kg;我国在GB 2763-2019中规定了蔬菜中各种农药残留限量要求。因此，研究和建立准确、高效的动植物除草剂残留检测方法，对于规范种植业发展、保障进出口贸易、保障人民健康具有重要意义。

目前，文献报道的蔬菜中除草剂残留检测的主要方法有气相色谱（GC）、气相色谱-质谱（GC-MS）、液相色谱（HPLC）和液相色谱串联质谱光谱分析（HPLC-MS/MS）等，样品纯化方法通常采用固相萃取（SPE）和QuEChERS方法。

目前我国食品中除草剂残留检测的前处理方法主要以SPE法为主。经典的SPE处理方法耗时长、步骤复杂，影响结果的稳定性和检测效率，不能满足大规模样品的高通量和快速检测要求。本文以韭菜中的多种除草剂残留物为研究对象。 Oasis PRiME HLB 色谱柱用于纯化样品，无需活化、洗涤、洗脱和吹氮。直接加载提取物以去除样品中的杂质，例如色素。采用 MS/MS 法测定了 10 种除草剂残留量。该方法纯化效率高、操作方便、灵敏度高、准确度好，为韭菜中除草剂残留的检测提供了新的可行途径。

实验部分

仪器和试剂

仪器：ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相色谱仪、Xevo TQ-XS 三重四极杆质谱仪、ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 mm×50 mm,1.7 µm) 色谱仪专栏（美国沃特世）； 3-18K5离心机（SIGMA，德国）； CP225D电子分析天平（Sartoris，德国）； Milli-Q 超纯水表（美国密理博）。

色谱条件：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 µm）；柱温40℃；进样量 5 µL；流速0.40 mL/min；二元梯度洗脱，流动相 A 为 0.1% 甲酸水溶液，流动相 B 为乙腈。梯度洗脱程序为：0-1.8 min，10%B-95%B； 1.8-2.0 min, 95%B; 2.0- 3.0 min, 95%B-10%B; 3.0-5.0 分钟，10%B。

质谱条件：电喷雾电离（ESI）源，正离子模式；多反应监测模式（MRM）；离子源温度：150℃；毛细管电压：1.00 kV；去溶剂化温度：600℃；脱溶剂气流量：1000 L/h；锥孔反吹气流量：150 L/h；碰撞气体流速：0.15 mL/min。 10种除草剂的质谱参数见表1。

标准产品和标准产品配置

标准品：甲醚磺隆 (100 µg/mL)、灭草喹 (100 µg/mL)、灭草啶 (100 µg/mL)、甲磺隆 (100 µg/mL)、氯芬吡胺 (100 µg/mL) 和嘧磺隆 (1000 µg/mL) 购自 AccuStandard Company；噻吩磺隆和吡嘧磺隆均购自 ANPEL 公司，浓度均为 100 µg/mL；氟嘧磺隆 氯苯嘧啶和苄嘧磺隆的浓度均为 100 µg/mL，购自 BePure 公司。

标准溶液配制：准确吸取一定量的10种除草剂标准溶液至50 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，在-20℃低温下配制1 μg/mL的混合标准中间溶液节省。使用前用空白样品提取液配制成一系列浓度的基质混合标准工作溶液。

样品制备

取韭菜样品（从当地市场购买），用组织捣碎器将其粉碎并充分混合，准确称量5.00 g放入50 mL离心管中，静置1 min，然后加入 10.0 mL 乙腈，涡旋 1 min，然后加入 QuEChERS 萃取盐包，剧烈振摇 1 min，8000 r/min 离心 5 min，收集上清液，等待 Oasis PRiME HLB 固体相萃取柱进行纯化。

将 Oasis PRiME HLB SPE 柱安装在预清洗的 SPE 装置上，无需活化，取 3 mL 上清液通过 Oasis PRiME HLB 柱，在重力作用下草甘膦母液回收，收集滤液，准确移取 100 µL滤液与400 μL纯水混合，用0.22 μm有机微孔膜过滤，用于UPLC-MS/MS测定。

结果与讨论

1、色谱条件的选择

以Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 µm)为分离柱，乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱对10种目标化合物的分离效果较好，灵敏度高，分析时间短。

2、样品预处理方法选择

色素等杂质是韭菜中农药残留分析的主要干扰因素。为减少基质干扰，提高方法的准确度和灵敏度，减少对色谱柱和质谱检测器的污染，本文采用固相萃取纯化方法。这样，将3 mL的样品萃取液直接装入Oasis PRiME HLB固相萃取柱，去除色素等杂质。该工艺简单、快速、高效，净化效果显着。

3、样本基质效应调查

为了考察样品基质效应的影响，在相同浓度下，分别测定空白基质提取液和纯溶剂中目标物质的响应强度，得到基质效应（ME）用两者的峰面积之比来评价。 ME1 表示存在矩阵增强效应。结果表明，10种目标化合物在4种韭菜基质中均具有不同程度的基质增强作用。为减少基质效应，提高结果的准确性，选用基质匹配标准曲线进行定量分析。

4、线性范围和检测限

使用空白矩阵溶液制备0.2、0.5、1.0、10.0、 2 按上述仪器条件测定0.0、50.0 µg/L的混合标准工作溶液，质量浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标。标准曲线线。检测限（LOD）以信噪比S/N=3计算，定量下限（LOQ）以S/N=10计算。结果如表2所示。10个靶标在0.2-50µg/L范围内具有良好的线性关系，其线性相关系数（R2）均大于0. 999. 检测限0.7-2.1 µg/kg，定量限2.1-6.8 µg/kg。

5、添加恢复和精度

取韭菜空白基质样品，进行两个浓度水平的加标回收率试验。添加质量的浓度分别为10、50 μg/kg。测试条件如上所述，每个添加量测量 6 次。 ，计算每种目标化合物的添加剂回收率和相对标准偏差。结果见表3。该方法在两个添加水平下的回收率均达到75.7%-113.8%，相对标准偏差为5.5 %-7.9%。

6、实际样品的测定

将该方法应用于从当地超市和市场随机采购的10份韭菜样品中进行测定，结果表明，所有样品均未检出待测除草剂。

结论

样品用乙腈萃取，Oasis PRiME HLB 固相萃取柱净化，ACQUITY UPLC BEH C18 色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.7 µm）色谱分离使用乙腈和 0.1% 甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源和多反应监测（MRM）在正离子模式下进行定量分析。结果表明，10种除草剂在0.2-50 μg/L（R2>0.999）范围内具有良好的线性关系，该方法的最低检出限为0. 7-2.1 µg/kg草甘膦母液回收，LOQ 为 2.1-6.8 µg/kg，2 个加标水平的加标回收率为 75. 7 %-113.8%，相对偏差5.5%-7.9%。该方法前处理简单快速，准确度好，灵敏度高，适用韭菜中10种除草剂残留量的测定。