1.氟比洛芬酯芬酯的杂质检测方法是什么？怎么检测？

1.本发明属于药物分析领域，具体涉及一种氟比洛芬酯的杂质检测方法。

背景技术：

2.氟比洛芬是一种非甾体抗炎药，具有抗炎和镇痛作用。氟比洛芬酯是氟比洛芬的前药，化学名称为（

±

)-1-乙酰氧基乙基2-(2-氟-4-联苯)丙酸酯。氟比洛芬酯注射液是一种以脂质微球为药物载体的非甾体类镇痛剂。药物进入体内并靶向分布到伤口和肿瘤部位后，氟比洛芬酯从脂质微球中释放出来，在羧酸酯酶的作用下迅速水解成氟比洛芬。氟比洛芬通过抑制花生四烯酸来抑制花生四烯酸。环氧合酶的活性，从而抑制引起疼痛和炎症的前列腺素的合成，发挥镇痛作用。临床应用广泛，具有镇痛、抗炎、解热作用，可用于手术后镇痛及各种癌症。

3.目前，氟比洛芬酯制剂中已知的杂质有（

±

)-2-(4-联苯)丙酸、1-(2-氟-4-联苯)乙酮、α-甲基-(2-氟-4-联苯)乙腈、α-甲基-3-氟-4-苯基苯乙酸甲酯，α-甲基-3-氟-4-苯基苯乙酰乙酯，4-乙基-2-氟-1,1'-联苯，4

’-

羟基氟比洛芬、乙酸乙烯酯、1-溴乙酸乙酯、2-溴乙酸乙酯、1,1-乙二醇二乙酸酯、2-溴乙酸乙烯酯。其中，1,1-乙二醇二乙酸酯是具有潜在遗传毒性的遗传毒性杂质。为保证后续药物制剂的安全性，应检测杂质1,1-乙二醇二乙酸酯，并将杂质残留量控制在合理限度内。但目前尚无有效检测氟比洛芬酯中杂质1,1-乙二醇二乙酸酯含量的方法。

技术实施要素：

4.针对目前市场上无法有效检测氟比洛芬酯中1,1-乙二醇二乙酸酯含量的问题，本发明旨在提供一种氟比洛芬酯的杂质检测方法。本发明填补了现有技术的空白。本发明通过检测氟比洛芬酯中杂质1，1-乙二醇二乙酸酯的残留量，可以更好地控制氟比洛芬酯的质量，本发明的检测方法准确度高，稳定性好，性能好，操作简单，针对性强，应用价值高。

5.为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

6.一种氟比洛芬酯的杂质检测方法，包括以下步骤：

7.色谱条件：

8.色谱柱为中等极性毛细管柱；

9.控温方式为程序加热；

10.喷油器温度：145℃～155℃；

11.探测器温度：175℃～185℃；

12.分流比：15:1～25:1;

13.记录色谱图。

14.在某些实施例中，色谱柱为以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定溶液的毛细管色谱柱，或等效极性的毛细管柱。更优选地，色谱柱为db-624色谱柱。

15. 在某些实施例中，色谱柱的柱长为25m-35m。更优选地，立柱长度为30m。

16. 在某些实施例中，色谱柱的内径为0.30mm～0.34mm。更优选地，内径为0.32mm。

17. 在某些实施例中，色谱柱的膜厚为1.60μm～2.0μm。更优选地，膜厚为1.80μm。

18. 在某些实施例中，温度程序的初始温度为45°C至55°C。更优选初始温度为50℃；

19. 在某些实施例中，温度程序的初始温度保持8-12分钟。更优选地，初始温度保持10分钟。

20. 在某些实施例中，升温程序的升温速率为8℃/min～12℃/min。更优选地，升温速率为10℃/min。

21. 在某些实施例中，程序升温是指将温度升高到145°C至155°C。更优选将温度升至150℃；

22.可选地，温度程序后保持温度2min-8min。更优选地，温度保持5分钟。

23.在某些实施例中，入口温度为150°C。

24.在某些实施例中，检测器温度为180°C。

25.在某些实施例中，分流比为20:1。

26.在某些实施例中，还包括将载气流速设置为0.8ml/min～1.2ml/min。更优选地，载气流速为1.0ml/min。

27.在一些实施例中，还包括试液的制备：取适量氟比洛芬酯，加甲醇溶解，稀释成每1ml含500mg的溶液。

28.在一些实施例中，还包括混合参比溶液的制备：取1,1-乙二醇二乙酸酯适量，用甲醇溶解稀释成1ml/1ml，1 -乙二醇二乙酸酯为15 μg的混合溶液。

图纸说明

29. 图。图1为实施例1中1,1-乙二醇二乙酸酯的检测图。

具体实现方法

30.下面结合附图对本发明的技术方案进行详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限制本发明。在以下实施例中，具体技术或条件未按照本领域文献描述的技术或条件进行说明。除非另有说明，以下实施例中使用的试剂、药物和仪器均可以通过常规商业途径获得。

31.示例 1

32. 将100升玻璃反应釜冷却至10-20℃，搅拌下加入氟比洛芬酯乙酸乙酯溶液（50升）。搁置一旁，分层。有机相用纯净水洗涤两次（氟比洛芬酯8.33倍量），饱和氯化钠溶液洗涤一次（氟比洛芬酯3.33倍量）氟乙酸甲酯的毒性，最后有机相获得了。将该相用无水硫酸钠（氟比洛芬酯0.83倍量）干燥1-2小时，并过滤。将滤液转移至50l旋转蒸发仪，45-50℃减压浓缩，真空度≥0.08mpa，浓缩至无液体蒸发，浓缩液为氟比洛芬酯粗品。杂质1,1-乙二醇二乙酸酯含量的检测氟乙酸甲酯的毒性，具体检测方法如下。

33.立柱：db-624，立柱长30m，内径0.32mm，液膜厚度1.80μm；

34.喷油器温度：150℃；

35.加热程序：初始温度为50℃，保持10分钟，然后以每分钟10℃的速度升至150℃，保持5分钟；

36.检测器：氢火焰离子化检测器（fid）；

37.探测器温度：180℃；

38.载气：n2;

39.流速：1.0ml/min;

40.进样量：1μl；

41.分流比：20:1；

42.空白溶剂：甲醇。

43.试液的制备：取本品适量，用甲醇溶解，稀释成每1ml含500mg左右的溶液，即为试液。

44.混合参比溶液的制备：取1,1-乙二醇二乙酸酯适量，用甲醇溶解稀释，使每1ml含有约1,1-乙二醇二乙醚酸酯为15 μg的混合溶液，摇匀即得混合参比溶液。

45.准确称量供试液和混合对照液，注入气相色谱仪，记录色谱图，如图1和表1所示。

46.表1 1,1-乙二醇二乙酸酯的测试结果

[0047][0048]

示例 2 特异性和系统适用性测试

[0049]

空白溶剂：甲醇。

[0050]

试液的制备：取本品适量，用甲醇溶解，稀释成每1ml含500mg左右的溶液，即为试液。

[0051]

混合参比溶液的制备：取1,1-乙二醇二乙酸酯适量，用甲醇溶解并稀释成每1ml溶液中含有1,1-乙二醇二乙酸酯约15μg的混合物，摇匀，即得是，混合参考溶液。

[0052]

系统适用性溶液的制备：取1,1-乙二醇二乙酸酯和氟比洛芬酯适量，加甲醇溶解稀释至每1ml约含1,1-乙二醇二乙醚15μg的溶液将500mg氟比洛芬酯和500mg氟比洛芬酯振荡得到系统适用性溶液。

[0053]

准确量取溶剂、混合参比溶液、试验溶液和系统适用性溶液各1 μl，直接注入样品中，记录色谱图。结果如表2所示。

[0054]

表2 氟比洛芬酯成品中1,1-乙二醇二乙酸酯的测定特异性试验结果

[0055]

[0056][0057]

检测结果表明，1,1-乙二醇二乙酸酯色谱峰的理论塔板数大于5000，供试品和空白溶剂均不干扰检测，该方法具有良好的专属性和系统性适用性。

[0058]

示例 3 耐久性测试

[0059]

为了验证该方法色谱条件的耐久性，载气流速、进样口温度、检测器温度、柱初始温度和分流比在一定范围。考察了对二乙酸乙二醇酯测定的影响，结果见表3。

[0060]

表3 1,1-乙二醇二乙酸酯在氟比洛芬酯中的耐久性试验结果

[0061][0062]

测试结果表明进样口温度对样品检测有显着影响，因此将进样口温度设置为150℃，载气流速为1.0ml/min

±

0.2ml/min，检测器温度180℃

±

5℃，柱温50℃

±

5℃，分流比为20

±

5个范围，使用同品牌、同规格的色谱柱，各溶剂峰的理论塔板数和分离度均符合要求，系统稳定性好。

[0063]

示例4 定量限和检测限

[0064]

取1,1-乙二醇二乙酸酯适量，用甲醇逐级稀释，取1 μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，根据信号值计算定量限- 信噪比为 10:1，并按 3:1 的信噪比计算检测限。结果见表4。

[0065]

表4 1,1-乙二醇二乙酸酯的定量限和检出限结果

[0066]

杂质1,1-乙二醇二乙酸酯的定量限（ng）8.910基于测试样品（%）0.0018

检出限（ng）4.689 基于测试样品（%）0.00094

[0067]

例5注塑精度测试

[0068]

取1,1-乙二醇二乙酸酯适量，精密称取，用甲醇定量稀释，配制成每1 ml含1,1-乙二醇二乙酸酯约15 μg的混合溶液，作为对照溶液精密量取1 μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，计算1,1-乙二醇二乙酸酯峰面积的相对标准偏差。结果见表5。

[0069]

表5 1,1-乙二醇二乙酸酯注射精度试验结果

[0070]

杂质 1,1-乙二醇二乙酸酯峰面积平均值 (uv*s) 35961210

±

sd1310

±

57.94rsd(%)4.4

[0071]

测试结果表明，该方法的注射精度良好。

[0072]

例6标准曲线制作

[0073]

取1,1-乙二醇二乙酸酯适量，精密称取，用甲醇定量稀释，配制成每1 ml含1,1-乙二醇二乙酸酯约30 μg的混合溶液，作为参比储备液解决方案。精密量取2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.5ml对照品储备液，放入10ml容量瓶中，分别。用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品系列溶液。各系列溶液各精密量取1 μl线性1、2、3、4、5个溶液，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，以浓度（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果如表6所示。

[0074]

表6 1,1-乙二醇二乙酸酯标准曲线制作试验结果

[0075][0076]

测试结果表明醋酸乙烯的浓度在7.185μg/ml～26.94μg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系（ γ=0. 9983); 1,1-乙二醇二乙酸酯的浓度在7.628μg/ml～28.61μg/ml的范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系（γ=0.9989)，线性关系良好。

[0077]

示例 7 重复性测试

[0078]

取同批次氟比洛芬酯，平行测定6份，计算杂质含量和相对标准偏差，测定结果见表7。

[0079]

表7 1,1-乙二醇二乙酸酯含量测定重复性试验结果

[0080][0081]

测试结果表明，六次实验结果一致，方法重复性好。

[0082]

示例 8 精度测试

[0083]

取1,1-乙二醇二乙酸酯适量，精密称取，用甲醇定量稀释，配制成每1ml含1,1-乙二醇二乙酸酯约75μg的溶液，作为对照品库存解决方案。取同批次供试品约2500mg，精密称取，三组平行，每组3份，分别放入5ml量瓶中，加入对照品原液0.8ml，1.@ > 三组各0ml和1.2ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别定容至极限溶液的80%、100%和120%，作为供试品溶液，测定各杂质的残留量，计算回收率。测量结果见表8。

[0084]

表8 1,1-乙二醇二乙酸酯精度测试的测量结果

[0085][0086]

测试结果表明，各溶剂的回收率均符合要求，该方法的准确度较好。

[0087]

实施例9样品中1,1-乙二醇二乙酸酯的测定

[0088]

取本品适量，精密称取，加甲醇溶解并定量稀释，制成每1ml约含500mg的溶液，作为供试品溶液；再取适量1,1-乙二醇二乙酸酯，精密称取，用甲醇定量稀释，制成每1ml含1,1-乙二醇二乙酸酯约15μg的混合溶液，作为对照溶液。根据上述色谱条件确定，准确称取混合对照溶液和供试溶液各1 μl，直接注入样品中，记录色谱图。该产品不应含有超过 0.003% 的 1,1-乙二醇二乙酸酯。测量结果见表9。

[0089]

表9样品中1,1-乙二醇二乙酸酯残留量测定结果

[0090]

Lot No. 1231,1-乙二醇二乙酸酯残留量（%）未检出，未检出，未检出

[0091]

检测结果表明，三批样品均未检出醋酸乙烯酯和1,1-乙二醇二乙酸酯，均符合规定

确定。

[0092]

本发明的保护内容不限于上述实施例。本领域技术人员在不脱离本发明构思的精神和范围内所能想到的变化和优点，均包含在本发明的范围内，所附权利要求为保护范围。