一种赭曲霉毒素A富集净化材料及其制备方法和应用

本发明专利技术公开了一种赭曲霉毒素A富集纯化材料及其制备方法和应用。该制备方法包括以下步骤： 1)将载体与血清白蛋白溶液混合，偶联得到与血清白蛋白偶联的载体。 2)阻断并清洗与血清白蛋白结合的载体，采用脉冲电场、加热、超声、高压中的任一种进行治疗；其中，步骤1)中，载体为超顺磁性磁珠或琼脂糖。该方法以低成本易得的血清白蛋白为识别元件，以超顺磁性磁珠或琼脂糖为载体，通过脉冲电场、加热、超声等方法处理，获得强结合力。该材料可用于植物油、谷物等各类样品中赭曲霉毒素A的富集纯化，便于后期样品中赭曲霉毒素A的定量检测，可大大降低样品中赭曲霉毒素A的浓度。检查费用。可显着降低赭曲霉毒素A检测成本。可显着降低赭曲霉毒素A检测成本。

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【技术实现步骤总结】

一种赭曲霉毒素A的富集纯化材料及其制备方法和应用

[0001]专利技术涉及食品安全检测

具体涉及一种赭曲霉毒素A富集纯化材料及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002] 赭曲霉毒素A(OTA)是由部分青霉素和曲霉产生的霉菌毒素，OTA不仅可以污染各种农产品，还可以污染各种加工食品（如酒、面包和肉制品）。 OTA具有神经毒性、肝肾毒性等多种毒性作用，被国际癌症研究机构（IARC）列为2B类致癌物。此外，它作为一种生殖毒素和内分泌干扰物，对人类生殖健康造成损害。因此，基于OTA的毒性作用对人体健康造成的多重威胁，为降低通过食物摄入OTA的风险血清白蛋白浓度，许多国家、地区和国际组织都对食品中OTA的含量建立了严格的限制。如欧盟规定：谷类制品中OTA的MRL为3.0μg/kg；未加工谷物的最大残留限量为5.0μg/kg；在速溶咖啡中（速溶咖啡中 10.0 μg/kg）； 5.0 μg/kg 烘焙咖啡； 5.0 μg/kg 在葡萄酒和葡萄汁中2.0μg/kg；小麦蛋白的最大残留限量为8.0μg/kg。我国国标法规定，粮食及其碾磨制品中OTA的限量为5.0μg/kg，豆类及其制品中OTA的限量为5.0μg/kg。因此，为防止OTA造成食品安全问题，建立有效的OTA污染残留监测和检测方法至关重要。

[0003]目前OTA的检测方法主要有薄层色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金免疫色谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱串联质谱法等。其中，薄层色谱法因溶剂消耗大、重现性差等原因逐渐被其他方法取代。类似方法容易出现假阴性和假阳性结果，无法准确量化；而高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法具有灵敏度高、准确度高等优点，可以准确定量，但检测前需要对样品进行检测。预处理。

[0004]样品预处理是OTA检测分析方法中的重要步骤。通过样品预处理可以富集和浓缩目标物，从而提高检测灵敏度，减少基质效应和干扰成分，因此样品预处理方法会显着影响检测结果的准确度和精密度。目前常用的预处理方法有免疫亲和柱（IAC）和免疫磁珠富集纯化法。这两种方法一般都使用单克隆抗体或多克隆抗体作为识别元件来富集纯化OTA，但这种识别元件一般都存在制备繁琐、使用成本高等缺点。因此，有必要开发一种操作简单、成本低廉、精度相同的新型OTA富集纯化材料。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种赭曲霉毒素A富集纯化材料的制备方法。该方法以廉价易得的血清白蛋白为识别元件，以超顺磁性磁珠或琼脂糖为载体，采用脉冲电场、加热、超声等方法处理。 强赭曲霉毒素A富集用于赭曲霉毒素A的前处理及后续定量分析，可大大降低赭曲霉毒素A的检测成本。

[0006]本专利技术的第二个目的是提供一种通过上述方法制备的赭曲霉毒素A富集纯化材料。

[0007]本专利技术的第三个目的是提供一种检测赭曲霉毒素A的样品前处理方法。

[0008]本专利技术的第四个目的是提供上述赭曲霉毒素A富集纯化材料或上述样品前处理方法在赭曲霉毒素A检测分析中的应用。

[0009]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：

[0010]在第一方面，专利技术提供了一种赭曲霉毒素A富集纯化材料的制备方法，包括以下步骤：

[0011]1)将载体与血清白蛋白溶液混合，进行偶联反应，得到与血清白蛋白偶联的载体；

[0012]2)对血清白蛋白偶联载体进行封闭清洗，然后用脉冲电场、加热、超声、高压中的任意一种处理，得到；

[0013] 其中，步骤1)中，所述载体为超顺磁性磁珠或琼脂糖。

[0014] 需要说明的是，传统上用于赭曲霉毒素A富集纯化的识别元件多为单克隆抗体或多克隆抗体。这种识别元件的缺点是制备复杂，使用成本高。专利技术首次提出以血清白蛋白为识别元素，以超顺磁性磁珠或琼脂糖为载体，通过脉冲电场、加热、超声等手段提高血清白蛋白与赭曲霉毒素A的亲和力等手段，最终得到了能够稳定结合赭曲霉毒素A的富集纯化材料，该材料用于对含有赭曲霉毒素A的样品进行预处理，不仅不会影响后期检测结果的准确度和精密度，而且可以大大降低赭曲霉毒素检测成本。

[0015]进一步地，脉冲电场的处理条件为：强度为10

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80kV/cm，时间为0.2ms

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2ms;强度最好是10

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30kV/cm;

[0016] 所述加热的处理条件为:温度为60

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80℃，时间3ms

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20ms;

[0017]超声波处理条件为：功率为50

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200W，时间为0.5ms

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5ms;

[0018]高压处理条件为：压力为500

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1000MPa，时间为0.1ms

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1 毫秒。

[0019] 其中，脉冲电场、加热、超声、高压任一种的治疗强度和治疗时间在本专利技术范围内均能更好地激活血清白蛋白，并最大限度地提高。血清白蛋白与赭曲霉毒素A的结合能力过高可能导致血清白蛋白失活，过低会影响活化效果。

[0020]进一步地，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、鸡蛋血清白蛋白或人血清白蛋白。

[0021] 进一步地，所述琼脂糖为溴化氰修饰的琼脂糖，N

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羟基琥珀酰胺修饰的琼脂糖或链霉亲和素修饰的琼脂糖。

[0022]进一步地，当载体为琼脂糖时，血清白蛋白溶液的浓度为50

-

200mg，示例性地，血清白蛋白溶液的溶剂为0.1 M PBS，pH=7.2。

[0023]进一步地，当载体为超顺磁性磁珠时，血清白蛋白溶液的浓度为1

-

50mg/mL，例如血清白蛋白溶液的溶剂为100mM MES，pH=6.0。

[0024]其中，血清白蛋白溶液浓度过低或过高都会降低载体上偶联血清白蛋白的量，从而影响赭曲霉毒素A富集纯化材料的富集效果。

[0025]进一步地血清白蛋白浓度，当载体为琼脂糖时，偶联反应在室温下进行，反应2

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18 小时；最好在摇床上过夜。

[0026]进一步地，当载体为超顺磁性磁珠时，偶联反应为室温，反应1

-

5 小时。

[0027]其中，偶联反应的时间和温度会影响载体结合血清白蛋白的量，进而影响

赭曲霉毒素A富集纯化材料的富集效果。

[0028] 进一步地，所述的密封具体包括以下步骤：将与血清白蛋白偶联的载体放入Tris中

-

室温下在 HCl 缓冲液中的反应 2

-

8 小时；

[0029] 此外，Tris

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HCl 缓冲液浓度为 0.1

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0.5mol/L，pH值

【技术保护点】

【技术特点总结】

1.一种赭曲霉毒素A富集纯化材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤： 1)将载体与血清白蛋白溶液混合，偶联反应得到与血清白蛋白偶联的载体； 2)将与血清白蛋白偶联的载体密封、洗涤，然后用脉冲电场、加热、超声、高压中的任一种处理，即得到；其中，步骤1)中，载体为超顺磁性磁珠或琼脂糖。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脉冲电场的处理条件为：强度为10

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80kV/cm，时间为0.2ms

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2ms;加热的加工条件为：温度60

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80℃，时间3ms

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20 毫秒；超声波处理条件为：功率为50

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200W，时间为0.5ms

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5ms;高压处理条件为：压力为500

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1000MPa，时间为0.1ms

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1 毫秒。 3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、蛋血清白蛋白或人血清白蛋白。优选地，琼脂糖是溴化氰化物修饰的琼脂糖，N

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羟基琥珀酰胺修饰的琼脂糖或链霉亲和素修饰的琼脂糖。 4.根据权利要求1所述的制备方法，其中载体为琼脂糖时，血清白蛋白溶液的浓度为50

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200mg/mL；载体为超顺磁珠时，血清白蛋白溶液浓度为1

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50 毫克/毫升。 5.根据权利要求1所述的制备方法，其中载体为琼脂糖时，偶联反应为室温，反应2

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【专利技术属性】

技术研发人员：叶进、王松学、刘红梅、陈金南、

申请人（专利权）：国家粮食和物资储备局科学研究所，

类型：发明

国家省份：

下载所有详细的技术数据我是该专利的所有者