蛋白质的分离提取技术有哪些？的原理是什么？

众所周知，人类的生命活动中不能缺少蛋白质。许多食物都含有蛋白质成分。正常的饮食可以为身体补充蛋白质。事实上，在生化研究领域，蛋白质的分离提取技术有着广泛的应用。提取蛋白质非常困难。需要经过多道工序，需要找到专业的操作技巧。现在有以下几种方法来提取蛋白质。

1、超速离心

这种抗原分离纯化方法的原理是利用梯度溶液中每个颗粒不同的沉降速度，使不同沉降速度的颗粒处于不同的密度梯度层中，从而达到从每个颗粒中分离出来的目的。其他。常用的密度梯度介质有蔗糖、甘油、CsCl等。

超速离心或梯度密度离心用于分离纯化抗原，除个别成分外，某一抗原成分极难分离，故仅用于少数大分子抗原的分离，如IgM、 C1q、甲状腺球蛋白等，以及一些比重较轻的抗原物质，如载脂蛋白A、B等。大部分中小分子量蛋白质很难用这种方法纯化。

2、选择性沉淀

其原理大多是根据每种蛋白质的理化性质的差异，利用各种沉淀剂或改变一定的条件促进蛋白质抗原成分的沉淀，从而达到提纯的目的。最常用的方法是盐析沉淀法。

盐析法的原理

蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数量，即主要由蛋白质分子外围亲水基团形成水化膜的程度决定与水和带电荷的蛋白质分子的条件。在蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，蛋白质分子周围的水化层减弱甚至消失。同时，在蛋白质溶液中加入中性盐后，由于离子强度的变化，蛋白质表面的电荷在很大程度上被中和，进一步降低了蛋白质的溶解度，引起聚集和蛋白质分子的沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度下的溶解度不同，不同饱和盐溶液沉淀出来的蛋白质也不同，从而与其他蛋白质分离。最常用的盐溶液是饱和度为 33% 至 50% 的硫酸铵。盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种球蛋白的提取、蛋白质的浓缩。盐析法纯化的抗原纯度不高，仅适用于抗原的初步纯化。

3、凝胶色谱法

凝胶色谱法使用分子筛分离蛋白质。凝胶是一种具有三维多孔网络结构的物质。在适当的溶液平衡后，将其加载到色谱柱中。当含有各种分子的样品溶液缓慢流过凝胶色谱柱时，大分子物质不易进入凝胶颗粒的微孔中，只能分布在颗粒之间，因此洗脱时向下运动的速度更快，被洗脱下来第一的。小分子除了在凝胶颗粒的间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，在洗脱过程中缓慢向下移动蛋白质粉提取技术，然后被洗脱下来。因此，蛋白质分子是按分子大小分开的。

4、离子交换色谱法

离子交换层析的原理是利用一些带有离子基团的纤维素或凝胶来吸附和交换带相反电荷的蛋白质抗原。由于各种蛋白质的等电点不同，携带的电荷量不同，与纤维素（或凝胶）结合的能力也不同。在梯度洗脱过程中，流动相的离子强度逐渐增加，使加入的离子与蛋白质竞争纤维素上的电荷位置，从而使吸附的蛋白质从离子交换剂中解离出来。

离子交换色谱中常用的离子交换剂有以下几种

①具有离子交换基团的纤维素蛋白质粉提取技术，如羧甲基（CM）纤维素、DEAE-纤维素

②具有离子交换基团的交联葡聚糖、琼脂糖和聚丙烯酰胺

③凝胶合成的高交联树脂。

5、亲和层析

亲和色谱是利用生物大分子的生物学特异性，即生物大分子之间的特异性亲和性而设计的一种色谱技术。例如，抗原与抗体、酶与酶抑制剂（或配体）、酶蛋白与辅酶、激素与受体、IgG与葡萄球菌蛋白A（SPA）等物质之间具有特殊的亲和力。例如，在纯化IgG时，SPA可以吸附在惰性固相基质（如Speharose 2B、4B、6B等）上，制备成层析柱。当样品流过色谱柱时，待分离的IgG可以与SPA特异性结合，其余成分不能与其结合。色谱柱完全洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH值，使IgG与固相基质上的SPA解离，收集洗脱液，得到待纯化的IgG。